南京中医药大学学报杂志

南京中医药大学学报杂志2022年第6期

• “消风法”三期分证论治小儿哮喘

  汪受传, 林丽丽, 冯璐,

  哮喘患儿先天禀赋有异, 形成“伏风”内潜的体质, 加之贼风外邪侵犯, 两风相合引起哮喘发病。提出在传统哮喘发作期、缓解期的分期方法之外增加迁延期, “消风法”三期分证论治小儿哮喘: 发作期疏外风消伏风, 降气平喘; 迁延期扶正气抑伏风, 缓解发作; 缓解期补脏气御外风, 调补肺脾肾。论述如何从消风论治小儿哮喘三期证候, 明确哮喘“伏风”证候演变特点及辨证治疗规律, 结合现代机制研究, 为小儿哮喘的中医临床诊疗提供理论支持及实施策略。

• 儿童哮喘中医诊疗指南(修订)

  赵霞, 秦艳虹, 王有鹏, 王孟清, 薛征, 陈健, 孙丽平, 吴力群, 吴振起, 赵琼, 万力生, 何丽, 虞舜, 李岚, 戴启刚, 尤焱南, 陈柏蕾,

  在完成文献检索评价、形成文献总结基础上, 通过2轮专家调查问卷、专家论证会、公开征求意见等修订流程, 形成《儿童哮喘中医诊疗指南(修订)》。此次修订提出指南适用范围、规范性引用文件、术语和定义、诊断、分期、辨证、治疗、预防和调护等, 旨在为儿童哮喘中医临床实践、诊疗规范和质量评价提供重要参考。

• 固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道上皮紧密连接蛋白及CCSP的影响

  姜越, 张宇林, 董盈妹, 严花, 赵霞,

    目的  研究固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠气道上皮紧密连接蛋白及Clara细胞分泌蛋白(CCSP)的影响, 探讨其防治缓解期哮喘的可能机制。  方法  联合使用卵清蛋白(OVA)及呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)建立哮喘缓解期小鼠模型, 将36只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、固本防哮饮低剂量组、固本防哮饮中剂量组、固本防哮饮高剂量组和孟鲁司特钠组, 每组6只。模型建立完成后, 固本防哮饮各剂量组分别予不同剂量(12、24、36 g·kg-1)固本防哮饮, 孟鲁司特钠组予2.6 mg·kg-1孟鲁司特钠，各组均灌胃28 d。末次给药后24 h留取样本。使用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组小鼠肺组织病理; Western blot、qPCR及免疫组化检测各组小鼠肺组织中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)等气道上皮紧密连接蛋白表达; ELISA法检测肺组织及肺泡灌洗液(BALF)中CCSP的表达。  结果  HE染色结果显示, 与正常组相比, 模型组小鼠肺组织中可见明显的炎性细胞浸润(P < 0.01), 固本防哮饮中、高剂量组小鼠肺组织中炎性细胞浸润减少(P < 0.05，P < 0.01);与正常组相比，模型组中ZO-1、闭合蛋白(Occludin)和桥粒芯胶蛋白(Desmocollin)的蛋白表达水平显著降低(P < 0.05，P < 0.01)，免疫组化结果显示上述指标蛋白在模型组中表达减少(P < 0.01, P < 0.001)且排列松散, 固本防哮饮各剂量组对上述蛋白表达有不同程度地回调; 同时，模型组中ZO-1、ZO-2、纽带蛋白(Vinculin)、连环蛋白(Catenin) mRNA的表达水平显著降低(P < 0.05，P < 0.01)，固本防哮饮高剂量组ZO-1、ZO-2、Vinculin、Catenin mRNA表达水平显著升高(P < 0.05);与正常组相比, 模型组小鼠肺组织及BALF中CCSP的表达显著下降(P < 0.01), 低、高剂量固本防哮饮显著增加肺组织及BALF中CCSP的表达(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  固本防哮饮能够上调气道上皮紧密连接蛋白以及CCSP的表达水平, 修复上皮损伤, 恢复上皮屏障功能, 从而防治哮喘。

• 清肺口服液黄酮类成分改善RSV感染小鼠肺上皮屏障损伤的机制研究

  凌晓颖, 孙逊, 李维峰, 袁斌,

    目的  探讨清肺口服液黄酮类成分(Fla)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠肺上皮屏障损伤的保护机制。  方法  将BALB/c小鼠随机分为正常组，模型组，Fla低、高剂量组(30、60 mg·kg-1·d-1)，阳性药利巴韦林组(46 mg·kg-1·d-1)。建立RSV感染的小鼠模型, 持续给药4 d后, HE染色观察肺组织病理学变化; ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量; 以BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比评估肺上皮通透性; Western blot检测肺组织紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、p-p38 MAPK、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)的蛋白表达。  结果  与模型组相比, Fla高、低剂量组小鼠肺组织病理损伤减轻(P < 0.05, P < 0.01), BALF中IL-1β、TNF-α含量下降(P < 0.05, P < 0.01), BALF蛋白含量和BALF/血清荧光比降低(P < 0.05, P < 0.01), 肺组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达升高(P < 0.05, P < 0.01), p-p38 MAPK/p38 MAPK、TLR4、MyD88蛋白表达下降(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  Fla可能通过抑制TLR4/MyD88/p38 MAPK通路, 促进紧密连接蛋白表达, 减轻肺部炎症, 从而改善RSV导致的肺上皮屏障损伤。

• 黄龙止咳颗粒治疗哮喘的网络药理学研究及实验验证

  王璇, 钱桂英, 凌晓颖, 严花, 汪受传, 单进军,

    目的  结合网络药理学方法和实验验证探讨黄龙止咳颗粒治疗哮喘的作用靶点及潜在机制。  方法  借助TCMSP、TCMID、Swiss Target Prediction等数据库检索黄龙止咳颗粒的化学成分和作用靶点。通过GeneCards、OMIM、Disgenet、Drugbank数据库筛选出哮喘的疾病靶点。使用Cytoscape软件构建“药物-成分-靶点-疾病”的网络图和潜在靶点的相互作用关系, 通过富集分析预测作用机制。构建哮喘小鼠模型, 通过病理染色, ELISA检测, qPCR及Western blot来验证网络药理学富集分析结果。  结果  共获得黄龙止咳颗粒中175种活性成分、1 026个药物靶点, 哮喘900个疾病靶点, 得到药物-疾病共同靶点153个, GO富集分析共得到条目1 967个, KEGG通路富集筛选出包括TNF信号通路在内的共计84条信号通路。动物实验表明, 黄龙止咳颗粒能有效改善哮喘小鼠的气道炎症, 并通过影响TNF信号通路从而抑制MAPK和NF-κB信号通路。  结论  该研究初步揭示了黄龙止咳颗粒治疗哮喘的作用机制, 为临床用药和后续研究提供参考依据。

• 杞丹方对糖尿病小鼠降血糖作用及机制研究

  冯一帆, 吴励萍, 张祎盈, 钱大玮, 段金廒, 宋孝雄, 吕高虹, 朱悦, 许惠琴,

    目的  研究杞丹方对糖尿病小鼠降血糖作用并探讨相关机制。  方法  取SPF级ICR雄性小鼠, 禁食16 h后腹腔注射四氧嘧啶120 mg·kg-1, 5 d后禁食12 h测血糖, 血糖值在10~25 mmol·L-1为糖尿病造模成功。将造模成功的ICR雄性糖尿病小鼠, 分为模型组, 二甲双胍组, 杞丹方低、中、高剂量组(0.34、0.67、1.34 g·kg-1·d-1), 正常ICR雄性小鼠为空白组, 给药30 d。每10 d记录体质量和空腹血糖(FBG)1次, 30 d后进行葡萄糖耐量试验(OGTT); ELISA法检测血清胰岛素水平并摘取胰腺、肝脏组织, 进行HE染色, 观察其病理改变; 采用Western blot和qPCR检测肝脏组织IRS-1、PI3K、AKT和GLUT4的表达水平。  结果  与模型组相比, 杞丹方中、高剂量组小鼠FBG水平、糖耐量显著降低(P < 0.01)，血清胰岛素水平显著升高(P < 0.01)。杞丹方各剂量组胰腺和肝脏组织结构有明显改善, 胰岛形态得到一定程度恢复, 少见肝脏组织异常与血管充血。杞丹方高剂量组能显著上调肝脏组织中的p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和GLUT4蛋白表达水平(P < 0.01);显著上调肝脏组织中的IRS-1、PI3Kp85α、AKT1和GLUT4 mRNA水平(P < 0.01)。  结论  杞丹方对糖尿病小鼠具有降血糖作用, 其作用机制是通过调控IRS-1/PI3K/AKT信号通路来实现的。

• 基于肠道菌群探讨水合橙皮内酯对AS抑郁症共病模型大鼠的调节作用

  王喆, 孙波, 任平, 黄熙,

    目的  分析水合橙皮内酯(Meranzin hydrate, MH)治疗AS和抑郁共病的疗效, 探讨药物的作用机理。  方法  实验采用维持饲料饲养SD大鼠作为对照组, 高脂饲料饲养ApoE-/-大鼠12周建立AS抑郁症共病模型, 并随机分为模型组和干预组(MH3.5 mg·kg-1、MH 7 mg·kg-1和辛伐他汀7 mg·kg-1), 每组6只。  结果  MH干预能有效降低血浆和海马促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平, 调整血脂水平, 下调主动脉斑块面积, 增加海马5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine, 5-HT)水平, 改善大鼠抑郁样行为, 调整肠道菌群结构。  结论  MH通过抗炎调脂, 调整肠道菌群结构从而发挥抗AS抑郁共病的作用。

• 胆南星拮抗热性惊厥模型小鼠脑组织损伤及炎症的作用研究

  曾平, 闫玉梅, 郁红礼, 吴皓, 陶兴宝, 谢雨薇, 程砚秋, 王彩霞, 王贺鹏, 陈劲松,

    目的  研究胆南星拮抗热性惊厥模型小鼠脑组织损伤及炎症的药效作用。  方法  采用干酵母混悬液及戊四氮溶液构建热性惊厥小鼠模型, 考察不同剂量胆南星水提物对模型小鼠肛温、惊厥潜伏期及惊厥持续时间的影响, HE染色观察小鼠海马神经元形态, ELISA法检测小鼠血清cAMP、PGE2水平, Western blot法检测脑组织COX-2、iNOS、γ-氨基丁酸A型受体(GABAAR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白表达, qPCR法检测海马组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达。  结果  与模型组比较, 胆南星高剂量组能够降低模型小鼠肛温(P < 0.05), 延长惊厥潜伏期(P < 0.05), 缩短惊厥持续时间(P < 0.01), 上调GABAAR蛋白表达(P < 0.05);同时降低血清cAMP、PGE2水平(P < 0.01), 改善海马神经元细胞形态学变化, 下调脑组织COX-2、iNOS、GFAP蛋白表达(P < 0.05), 降低海马组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平(P < 0.05)。  结论  胆南星具有良好的抗热性惊厥作用, 其机制可能与解热、拮抗脑组织炎症有关。

• 生姜细胞外囊泡样纳米粒载吴茱萸碱的处方工艺及体外释药研究

  赵梦, 刘卓雅, 于嘉敏, 王芮, 范铭婕, 乔宏志,

    目的  采用生姜细胞外囊泡样纳米粒(EVNs)来源脂质制备载吴茱萸碱(EVO)的脂质体, 以改善其成药性。  方法  采用差速离心法分离生姜EVNs, 筛选EVNs脂质的提取溶剂。薄膜分散法制备载EVO脂质体(EVO@Lipo), 以包封率为指标, 正交试验优化处方和制备工艺。采用粒度电位分析、差示量热扫描(DSC)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)对EVO@Lipo进行表征, 并考察EVO@Lipo的体外释药行为。  结果  筛选出三氯甲烷、甲醇-三氯甲烷、乙醇-二氯甲烷作为脂质的提取溶剂, 正交试验优化确定载药脂质体的最优制备条件为采用甲醇-三氯甲烷(2∶1)提取脂质, 药脂比为1∶50, 超声条件60 W、15 min。制得的EVO@Lipo包封率为88.21%, 平均粒径194.9 nm, PDI为0.22, Zeta电位为-35.3 mV, 并证明EVO@Lipo并非药物和脂质的物理混合物。体外释放实验显示, EVO@Lipo能延缓药物的释放。  结论  EVNs来源脂质可装载疏水性药物EVO, 提高其溶解性, 并具有一定的缓释作用。

• 丹参酮ⅡA-甘草酸自组装纳米胶束的制备及体外抗脑胶质瘤评价

  梁启凡, 崔季维, 张新茹, 郭雨苗, 王若宁, 狄留庆,

    目的  将丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA, Tan ⅡA)封装于甘草酸(Glycyrrhizic acid, GL)中自组装得到胶束, 考察其制备工艺并对产物进行表征, 同时进行体外抗胶质瘤细胞活性评价。  方法  采用薄膜分散法制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束(Tan ⅡA-GL/Micelle, TGM)。测定TGM的粒径、多分散系数以及Zeta电位；透射电子显微镜观察TGM的形态特征；高效液相色谱法测定TGM的包封率；透析袋法考察TGM的药物释放情况。倒置荧光显微镜考察TGM体外跨血脑屏障(Blood-brain barrier, BBB)的能力; 定量考察细胞摄取的具体机制; MTT法考察游离Tan ⅡA、游离GL和TGM分别对鼠源性脑胶质瘤细胞GL261的细胞毒性; 流式细胞仪检测游离Tan ⅡA、游离GL及TGM对GL261的细胞凋亡作用。  结果  薄膜分散法是制备载丹参酮ⅡA-甘草酸自组装胶束的最佳工艺方法; TGM粒径约为(121.87±5.85)nm, Tan ⅡA包封率为(88.54±14.27)%, 呈类球形形态, 制剂均一稳定; 可在5 h左右释放包载药物。TGM具有良好的跨BBB能力; 脑胶质瘤细胞摄取自组装胶束的机制为通过网格蛋白介导的胞吞来进行制剂的摄取; 对于脑胶质瘤细胞GL261具有良好的细胞毒性; 细胞凋亡实验结果表明, TGM相较于Free TanⅡA、Free GL组显著提高细胞凋亡水平, 促细胞凋亡率分别由12.28%、13.32%上升至31.16%。  结论  GL与Tan IIA通过自组装形成了纳米胶束，有效克服TanⅡA生物利用度低、水溶性差等缺点。TGM可有效跨越BBB，通过网格蛋白介导的胞吞途径被脑胶质瘤细胞摄取，具有良好的细胞毒性与促细胞凋亡能力。

• 基于液质联用技术的南北产地桔梗药材皂苷谱差异研究

  许伟辰, 罗子宸, 何钰, 狄留庆, 郭青, 单进军,

    目的  通过鉴定9个省(市)的57批桔梗药材中皂苷类成分, 绘制并比较南北产地桔梗药材皂苷谱。  方法  以UPLC-LTQ-Orbitrap-MS和LC-MS/MS法测定桔梗药材中皂苷类成分, 采用主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)处理样品数据。  结果  桔梗药材中共鉴定出48种皂苷, PCA及OPLS-DA均显示南北桔梗药材中皂苷有较好区分, 共发现23种差异皂苷。靶标定量结果显示南桔梗中桔梗皂苷D、去芹糖桔梗皂苷D、远志皂苷D及去芹糖桔梗皂苷D2含量显著高于北桔梗。  结论  南北桔梗药材在皂苷成分上有着明显差异, 同时建立了快速、稳定的靶标定量方法, 可为桔梗药材质量控制提供参考。

• 从伏毒论治溃疡性结肠炎

  龙丹, 朱莹,

  总结全国老中医药专家学术经验继承指导老师朱莹教授从伏毒辨治溃疡性结肠炎的临证经验。认为正虚邪恋、伏毒损络为核心病机, 提出分期论治辨标本、既病防变逐伏毒、瘥后防复重脾肾之治则, 临证治疗以健脾固本为先，辅以疏肝温肾，以祛风、泻火、化湿、散瘀、逐痰之法荡涤伏毒。

• 经典名方厚朴麻黄汤古代文献研究

  周丽萍, 孙宇博, 范欣生,

  厚朴麻黄汤出自《金匮要略》, 为《古代经典名方目录(第一批)》收录的经典名方之一, 对该方组成药物等关键信息进行梳理分析具有重要意义。通过对古代含厚朴麻黄汤的医籍进行收集整理, 分析其功用主治、药物用量及煎服法，对方中分别用衡器、量器以及拟物用量的药物进行考证, 为临床应用及成方制剂开发提供参考。