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国内刊号：32-1247/R
国际刊号：1672-0482
发布日期:
作者：谢佳雨, 戴隆超, 王娜, 刘成, 王令充,
关键词：土鳖虫, 分离纯化, 活性蛋白, 肝癌, 肝纤维化,
目的 采用体外细胞实验评价土鳖虫醇提物中大分子蛋白各分离产物的抗肝癌与抑制肝纤维化活性, 明确土鳖虫的有效部位与成分。 方法 采用盐析法从土鳖虫醇提物中回收蛋白类成分, 将土鳖虫粗蛋白产物按分子量差异进行超滤, 将其分为EEPA、EEPB及EEPC三个不同的蛋白部位, 以抑制肝异常细胞增殖活性为导向, 筛选最佳活性蛋白部位; 接着经过DEAE阴离子层析及Sephadex G-100凝胶层析对活性粗蛋白部位进一步的纯化, 从EEPC中分离出一种纯化蛋白PC3-Ⅲ, 并对其进行LC-MS/MS分析; 最后利用细胞实验评价EEPC及PC3-Ⅲ体外抗肝癌及抑制肝纤维化的活性。 结果 在EEPA、EEPB及EEPC中, 分子量最大的蛋白部位EEPC表现出最高的抑制肝异常细胞增殖活性; 纯化蛋白PC3-Ⅲ分子量为10 kDa左右, 经LC-MS/MS鉴定表明，PC3-Ⅲ对同源蛋白A0A0M3STY1的覆盖率达到35%, 查库得到的肽段序列为QYSINFISAR、CNGDSCVCTFR和SNNFR; 体外细胞实验证明PC3-Ⅲ不仅通过抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞迁移来共同发挥抗肝癌药效, 还能抑制活化的肝星状细胞增殖从而延缓肝纤维化的进程, 疗效与EEPC相当。 结论 研究证实了土鳖虫大分子蛋白的抗肿瘤与抗肝纤维化的活性, 并分离得到均一蛋白产物PC3-Ⅲ, 为推进土鳖虫功效物质基础的认识与相关产品研发奠定了基础。
来源：2022年第12期
《南京中医药大学学报》期刊编辑部
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