南京中医药大学学报

作者：符秋雨, 王飞虾, 张峰, 郑仕中, 付金柏,

关键词：白术内酯Ⅲ, ASCT2, 肝星状细胞, 衰老, 肝纤维化, 谷氨酰胺代谢,

  目的  探究白术内酯Ⅲ诱导肝星状细胞(Hepatic stellate cell，HSC)衰老抗肝纤维化作用及机制。  方法  ASCT2 siRNA及白术内酯Ⅲ(40 μmol·L-1)分别作用于人源肝星状细胞LX2以抑制ASCT2, MTT评估细胞活力, EdU法检测细胞增殖, 细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老; Western blot检测LX2细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的变化, 激光共聚焦检测LC3自噬流和错误蛋白堆积的变化, 同时观察溶酶体标记物LAMP1的荧光情况, 以检测溶酶体功能和数量; 试剂盒检测LX2细胞内ROS、MDA水平及SOD活力, 流式细胞术分析线粒体ROS水平及膜电位。构建CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型, 白术内酯Ⅲ 20、30、40 mg·kg-1治疗性给药, HE、Masson和Sirius Red染色观察肝脏组织破坏以及胶原沉积情况, Western blot检测各组小鼠P21、P16表达水平, SA-β-Gal染色以及免疫组化分析衰老细胞的情况和来源。  结果  抑制ASCT2后, LX2细胞活力降低、衰老增加(P＜0.01), 同时细胞自噬功能增强、溶酶体数量增多但功能减弱, 加入氯喹(Chloroquine，CQ)清除溶酶体后, 细胞活力和自噬功能增加(P＜0.01)。抑制ASCT2后, LX2细胞内MDA、ROS水平上升, SOD活力下降(P＜0.01), 其中线粒体ROS水平上升及膜电位下降(P＜0.01), 加入鱼藤酮后, 细胞氧化还原稳态和溶酶体数量恢复(P＜0.01)。体内实验结果表明, 与模型组比较, 白术内酯Ⅲ改善肝组织结构破坏以及胶原沉积, 诱导肝纤维化小鼠肝组织中的HSC发生衰老, 抑制HSC活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达, 促进衰老指标P16、P21的表达(P＜0.01)。  结论  白术内酯Ⅲ通过抑制ASCT2诱导线粒体ROS增多、膜电位下降, 进一步促进HSC自噬功能增强、溶酶体数量增多和功能减弱, 从而诱导活化型HSC发生衰老。

来源：2024年第4期

《南京中医药大学学报》期刊编辑部

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