南京中医药大学学报

作者：叶才博, 陈祥宇, 杜杰勇, 杨玉彬, 舒尊鹏, 张莉,

关键词：补阳还五汤, miR-665, DRAM1, 自噬, 转录后调控, 血管衰老,

  目的  研究补阳还五汤对血管衰老的延缓作用, 探讨其机制是否与microRNA-665(miR-665)/DNA损伤调节自噬调控因子1(DNA damage-regulated autophagy modulator 1, DRAM1)信号介导的自噬有关。  方法  将自然衰老雄性SD大鼠随机分为衰老组, 补阳还五汤低、中、高(9.25、18.5、37.0 g·kg-1)剂量组和白藜芦醇组(80 mg·kg-1), 同时设立年轻组。分离胸主动脉, ELISA法测定血管组织衰老相关β-半乳糖苷酶(Senescence associated β-galactosidase, SA-β-Gal)活性和晚期糖基化终末产物(Advanced glycation end products, AGEs)水平; HE、Masson和EVG染色观察血管组织形态结构; qPCR检测血管组织miR-665表达; 生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验验证miR-665与DRAM1靶向关系; 透射电镜观察血管内自噬小体; Western blot法检测血管组织p16、DRAM1蛋白及自噬相关蛋白LC3、Beclin1和p62的表达; 免疫组织化学法检测血管组织DRAM1的蛋白表达。  结果  与年轻组相比，衰老组大鼠血管中SA-β-Gal活性、AGEs水平和p16蛋白表达增加(P＜0.01)；血管组织排列紊乱，中膜增厚，胶原纤维增加，弹力纤维出现断裂、紊乱；miR-665基因表达上调(P＜0.01)；自噬小体数量减少，Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低(P＜0.01)，p62蛋白表达升高(P＜0.01)；DRAM1蛋白表达降低(P＜0.01)。与衰老组相比，补阳还五汤和白藜芦醇干预能够降低衰老大鼠血管中SA-β-Gal活性(P＜0.01)、AGEs水平和p16蛋白表达(P＜0.05，P＜0.01)；改善血管形态和弹力纤维结构，降低血管组织胶原纤维含量。高剂量补阳还五汤明显下调miR-665基因表达(P＜0.01)，增加血管内自噬小体数量；中剂量和高剂量补阳还五汤明显上调Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达(P＜0.01)，下调p62蛋白表达(P＜0.05，P＜0.01)；高剂量补阳还五汤明显上调DRAM1蛋白表达(P＜0.05)。生物信息学分析显示，miR-665与DRAM1基因序列存在特异性互补结合位点，双荧光素酶报告实验证实miR-665靶向DRAM1基因并负调控DRAM1蛋白表达。  结论  补阳还五汤可能通过靶向抑制miR-665促进DRAM1蛋白表达, 进而促进血管自噬, 延缓血管衰老。

来源：2024年第4期

《南京中医药大学学报》期刊编辑部

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