南京中医药大学学报

作者：郑姗姗, 吴坚, 张瑞娟, 张翔, 郑晓霞, 卢雨佳, 黄磊, 孙庆敏,

关键词：胃癌, 外泌体, 肿瘤相关巨噬细胞, IDH1, 失巢凋亡, Caspase-3, 三羧酸循环代谢,

目的探讨健脾养正方调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)外泌体对胃癌失巢凋亡的影响及其机制。方法体外诱导人单核细胞THP-1建立TAM模型；超速离心法提取M0、TAM及TAM+健脾养正方外泌体，与胃癌细胞共孵育。流式细胞术检测各组外泌体对胃癌细胞失巢凋亡的影响。构建BALB/c移植瘤小鼠模型，Western blot检测移植瘤中凋亡蛋白的表达水平。Label-free质谱蛋白组学及生物信息学分析干预前后胃癌细胞中的差异蛋白；Western blot及qPCR实验检测差异蛋白异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)表达水平，泛素化实验检测IDH1的泛素化水平；试剂盒检测α-酮戊二酸(α-KG)、NADPH/NADP+、谷胱甘肽(GSH/GSSG)水平及活性氧(ROS)含量。结果TAM外泌体干预胃癌细胞后其失巢凋亡率降低(P < 0.05, P < 0.01)；而TAM+健脾养正外泌体干预后则显著升高(P < 0.05, P < 0.01)。小鼠体内实验中，TAM外泌体组瘤体内Cleaved Caspase-3/Caspase-3的比值降低(P < 0.05)，而TAM+健脾养正方外泌体干预后比值明显增高(P < 0.05)。蛋白组学分析显示IDH1在干预前后差异明显，且与三羧酸循环代谢相关。相较于M0组，TAM组外泌体干预的胃癌细胞IDH1泛素化水平升高，α-KG、NADPH/NADP+及GSH/GSSG水平明显增加，ROS含量降低(P < 0.05)，而TAM+健脾养正外泌体则可逆转上述现象。结论健脾养正方通过调控TAM外泌体使胃癌细胞IDH1发生泛素降解，降低胃癌细胞三羧酸循环代谢水平，促进ROS积累，诱发胃癌失巢凋亡，进而抑制胃癌发展。

来源：2024年第9期

《南京中医药大学学报》期刊编辑部

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