南京中医药大学学报

作者：欧沛思, 古洺赫, 林爱华, 刘奕明,

关键词：黄柏碱-11-<i>O-β-D</i>-葡萄糖醛酸苷, 制备方法, IR-HepG2细胞, 糖脂代谢, IRS1/PI3K/AKT信号通路, 分子对接,

目的建立黄柏碱(PHE)代谢产物黄柏碱-11-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(M1)的制备方法，探讨M1调节胰岛素抵抗(IR)-HepG2细胞糖脂代谢紊乱的作用及机制。方法利用肠微粒体体外孵育法结合高效液相、质谱、核磁共振(NMR)等技术完成对M1的制备、提取、分离纯化及鉴定。以二甲双胍为阳性对照，考察M1低(25 μmol·L-1)、中(50 μmol·L-1)、高(100 μmol·L-1)剂量给药IR-HepG2细胞24 h对其葡萄糖消耗量、糖吸收、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响。通过分子对接技术探讨M1与IRS1/PI3K/AKT通路各关键因子胰岛素表面受体(INSR)、胰岛素受体底物1(IRS1)、PI3K、AKT2的结合能力。采用qPCR法及Western blot法分别检测M1对IRS1/PI3K/AKT通路各关键因子mRNA及蛋白表达的影响。结果经NMR确认分离纯化所得产物为黄柏碱-11-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(纯度为95%)。与模型组相比，M1在各给药浓度均可显著提高IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量(P＜0.01，P＜0.001)及糖吸收水平(P＜0.001)，且作用比PHE更强(P＜0.001);在中、高给药浓度可显著降低细胞TG及TC含量(P＜0.001)，其中在TG水平上其改善作用优于PHE(P＜0.01);在各浓度均明显降低LDL-C含量(P＜0.001)，提高HDL-C含量(P＜0.01，P＜0.001)。分子对接结果显示M1与通路关键因子INSR、IRS1、PI3K、AKT2具有良好结合活性。与模型组相比，M1给药组不同程度提高INSR、IRS1、PI3K、AKT2、GLUT2 mRNA的表达，并且下调p-IRS1/IRS1蛋白表达(P＜0.001)，上调PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β蛋白表达(P＜0.05，P＜0.001)。结论建立的方法可用于制备高纯度M1, M1通过调控IRS1/PI3K/AKT信号通路改善糖脂代谢紊乱，从而缓解IR。

来源：2025年第7期

《南京中医药大学学报》期刊编辑部

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